一、显微镜的使用及保护方法

二、细菌动力（悬滴法）观察(示教）

三、细菌的基本形态观察

四、细菌特殊结构观察（示教）

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：油镜的使用与保护；细菌特殊结构
2. 熟悉：细菌的基本形态观察

50分钟

97分钟

一、实验讲解

1. 复习细菌的基本形态：球状、杆状、螺旋状。
2. 细菌的一般结构：从内－外：细胞壁，细胞膜，细胞质。
3. 细菌的特殊结构：具体内容见课件

2、染色标本观察的基本

二、学生练习油镜操作，观察细菌基本形态，看示教，画图

(3分钟)

一、录像：微生态与外界环境对微生物的影响

二、细菌染色检查－－革兰染色法

三、细菌分布实验

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：细菌染色检查－－革兰染色法；
2. 了解高压蒸汽灭菌器的使用方法及注意事项

３.认识细菌分布的广泛性，树立无菌操作观念

60分钟

87分钟

一、实验讲解与示范

(一)细菌染色检查－－革兰染色法

1. 细菌涂片标本的制作：

使用前后均用火焰灭菌；取生理盐水2环；取细菌涂片；干燥；固定

2.革兰染色步骤：

①初染：结晶紫           1分钟

②媒染：碘液             1分钟

③脱色：95%酒精           2-3次

④复染：沙黄(或复红)     半分钟

3. 用油镜观察细菌的基本情况

（二）细菌分布实验设计：

1. 空气中的细菌检查；
2. 物体表面细菌检查；
3. 手指消毒前后的细菌检查。

（三）讲解高压蒸汽灭菌器的使用方法、注意事项及主要用途

二、学生做实验或看示教等

1. 学生按要求取实验材料并作革兰染色；
2. 记录革兰染色结果；
3. 学生分组作细菌分布实验
4. 观察高压蒸汽灭菌器构造并了解其使用方法
5. 将细菌分布实验的的培养基集中放置进行培养

(3分钟)

一、录像：细菌的培养技术

二、细菌培养基的制作及细菌的生长现象(示教)

三、细菌的分离培养

四、细菌质粒提取与检测

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：熟悉细菌的常用培养方法
2. 熟悉：细菌质粒提取与检测方法
3. 了解：了解细菌的代谢产物；

1. 细菌的分离接种法——平板划线分离法
2. 质粒的提取法

60分钟

87分钟

一、实验讲解与示范

1. 举例说明分离纯种细菌的重要性及常用分离接种方法
2. 常用的纯种细菌接种法及其主要用途
3. 细菌的合成、分解代谢产物及其应用；介绍常见的细菌分解代谢试验的种类及其机理
4. 细菌培养基制作及相关材料示教
5. 进行平板划线分离混合菌液、斜面培养基接种纯种细菌、液体培养基接种纯种细菌、行半固体培养基接种纯种细菌、

6..操作完毕观察细菌的菌落

7. 观察细菌在固体、液体、半固体培养基上的生长情况
8. 观察细菌的糖发酵试验、吲哚试验、硫化氢试验、尿素分解试验和色素产生试验等试验结果
9. 细菌质粒的提取方法及注意事项

二、学生做实验或看示教等

1. 学生作平板划线分离法接种细菌
2. 学生按实验指导操作提取细菌质粒
3. 提取的质粒进行琼脂糖电泳并在紫外透射仪上观察。
4. 将试验结果集中放置进行培养

(3分钟)

一、录像：药敏试验

二、细菌的遗传与变异

三、紫外线的消毒作用

四、噬菌体的特异性测定

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：紫外线杀菌的原理及其作用特点熟悉
2. 熟悉：抗生素抑菌、杀菌的基本原理，熟悉药敏试验（纸片法）的基本操作方法
3. 了解：细菌性状变异的特点；了解噬菌体的噬菌特点（特异性）。

90分钟

55分钟

一、            实验讲解

1. 提问并讲解抗生素的概念及其来源，了解抗生素对细菌影响的意义
2. 介绍细菌常见的遗传与变异现象
3. 讲解紫外线消毒作用的机理及其应用范围
4. 介绍噬菌体的定义及其特点，讲解噬菌体的特异性测定试验的理论依据及其应用
5. 分组示范操作细菌药敏试验的过程并讲解操作注意事项
6. 示范操作紫外线的消毒作用
7. 展示细菌药敏试验结果
8. 展示紫外线的消毒作用试验结果

9. 讲解并展示细菌耐药性变异、鞭毛变异、菌落变异的试验结果

1. 讲解并展示噬菌体特异性测定试验结果及简要操作步骤

二、学生实验操作

1. 无菌进行细菌的药敏试验
2. 部分学生进行紫外线的消毒作用试验
3. 观察细菌耐药性变异、细菌鞭毛变异、细菌菌落变异现象
4. 观察噬菌体的特异性测定试验结果

(5分钟)

一、录像：化脓性球菌

二、病原性球菌性态与培养特性（示教）

三、脓汁标本分离与鉴定（一）

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：金黄色葡萄球菌和甲、乙溶血性链球菌的菌落特点；
2. 熟悉：血浆凝固酶试验原理和结果观察；抗链球菌溶血毒素“O”试验原理；
3. 了解：白色葡萄球菌菌落的特点

1. 甲、乙型溶血性链球菌溶血环的观察和区别

50分钟

90分钟

一、实验讲解

1. 常见的病原性球菌的种类和特点；
2. 金黄色葡萄球菌的特点为：菌落为金黄色，有溶血环，凝固酶试验阳性，能够发酵甘露醇，为致病性葡萄球菌；

白色葡萄球菌的特点和金黄色葡萄球菌刚好相反：菌落为白色，无溶血环，凝固酶试验阴性，不发酵甘露醇，为非致病性葡萄球菌；

3. 多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，此酶能使含有枸掾酸钠或肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝固。而非致病性葡萄球菌不产生此酶，所以血浆凝固酶试验可以鉴别葡萄球菌有无致病性。简述并且幻灯片演示操作过程。
4. 感染人体的大多数A族溶血性链球菌都能产生溶血毒素O，具有抗原性，能够刺激机体产生相应的抗体ASO（抗链球菌溶血毒素O），通过检测ASO可以用于链球菌感染的诊断。

二、学生做实验及写实验报告

1. 金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的菌落特点及甲、乙型溶血性链球菌在血琼脂平碟形成的溶血环可对比观察，并要求将看到的情况描述到实验报告中。（20分钟）
2. 脓汁标本涂片及革兰染色
3. 示教配合前面第3次实验的内容，复习分离划线接种法的操作，完成鉴定程序的第一步。

(10分钟)

一、            录像：弧菌

二、            肠道杆菌及弧菌形态示教

三、            脓汁标本分离鉴定（二）

三、肠道致病菌的分离与鉴定（一）

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：肠道致病菌的分离与鉴定的原理和整个流程；
2. 熟悉：分离鉴定各个步骤的试验方法和操作
3. 了解：常见的肠道杆菌的生化反应结果和动力情况

2. 最后致病菌鉴定结果的判断

45分钟

100分钟

一、实验讲解与示范

1. 分离鉴定标本是病人粪便或肠道杆菌混合菌液，本实验为方便学生操作，采用的是最后一种；
2. 所用到的培养基有伊红美蓝培养基（EMB）、SS培养基、含铁双糖培养基（KI），要求同学能够熟练辨别这些培养基及了解它们在整个流程中的所在位置；
3. 详细讲解肠道菌分离的整个流程图，重点在每个步骤中可疑致病菌的提取的要点。
4. 本实验最后的结果可以详细到能够鉴别出哪一种肠道致病菌，要求同学作最后结论。

二、学生做实验、看示教

1. 完成脓汁标本分离鉴定：血浆凝固酶试验的操作按照实验指导进行。
2. 大便标本分离的具体操作步骤参考实验指导进行，让学生根据示教的程序完成大便标本分离鉴定（一）。

(5分钟)

一、录像：厌氧菌

二、厌氧菌形态与培养特性示教

三、大便标本分离与鉴定（二）

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、肉毒杆菌的形态特点。
2. 熟悉：三种厌氧芽胞菌在疱肉基上的培养特点；
3. 了解：厌氧培养法

50分钟

90分钟

一、实验讲解

1. 芽胞杆菌形态与培养

（1）破伤风杆菌（示教）：观察破伤风杆菌的形态结构、染色性：形成芽胞，呈鼓槌状，G+；观察破伤风杆菌在疱肉基上的生长情况（与产气荚膜杆菌鉴别）

（2）产气荚膜杆菌（示教）

观察产气荚膜杆菌的形态结构、染色性：形成芽胞，芽胞不比菌体粗，G+

观察产气荚膜杆菌在牛奶培养基上的生长情况（汹涌发酵现象）

（3）肉毒杆菌杆菌（示教）

肉毒杆菌的形态结构、染色性：形成芽胞，与破伤风杆菌的比较在疱肉基上的生长情况（与产气荚膜杆菌鉴别）

2. 讲解EMB及SS培养基上可疑菌落的选取要点，并做示范，将无色半透明菌落接种到KI培养基中，完成大便标本鉴定程序第二步；

二、学生做实验或看示教

1. 学生观察几种细菌的形态及菌落特点。
2. 学生完成肠道菌可疑菌落的挑选及接种。

(10分钟)

一、录像：真菌

二、示教：白喉杆菌的形态染色；结核杆菌的抗酸染色，培养的菌落特点；

三、抗酸染色

四、大便标本分离鉴定（三）

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：白喉杆菌、结核杆菌的形态与染色性；抗酸染色法
2. 熟悉：白喉杆菌及结核杆菌的培养特性

50分钟

90分钟

一、实验讲解

1. 白喉杆菌

（1）白喉杆菌在吕氏血清斜面上的生长情况（示教）：白喉杆菌在亚碲酸钾培养基上的生长情况（示教）:光滑型的黑色菌落

（2）阿尔伯染色：在油镜下观察白喉杆菌的形态、排列及异染颗粒.

2. 结核杆菌

（1）在油镜下观察结核杆菌的形态、排列及染色性；

（2）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况（示教），强调结核杆菌的培养条件及菌落特征。

3. 取KI培养基的培养结果作示范，详细讲解可疑菌落接种在KI培养基上培养以后可能出现的几种现象和引起这些现象的肠道杆菌，应该选取上红底黄或者上红底黄带黑的KI培养基来进行流程的下一步；

二、学生做实验或看示教

1. 取上述这两种情况的KI培养基的细菌进行玻片凝集反应，所用的诊断血清是乙型副伤寒诊断血清。这是整个鉴别流程的最后一步。
2. 学生对白喉杆菌在显微镜下观察并绘图
3. 学生对痰涂片进行抗酸染色并在显微镜下找细长的分枝杆菌并绘图

抗酸染色法步骤按实验指导操作。

(10分钟)

一、录像：病毒

二、示教：真菌、支原体、螺旋体形态与培养特性；病毒包涵体观察；病毒培养法及细胞病变。

(含基本技能和实验方法等)

1. 掌握：病毒的培养方法；钩体的形态，真菌的种类及结构，真菌菌落的种类
2. 熟悉：麻疹病毒包涵体；支原体菌落
3. 了解：动物接种病毒法；真菌的小培养

真菌菌落的种类

100分钟

50分钟

1. 病毒包涵体的概念；
2. 病毒培养法：鸡胚接种法

流感病毒按无菌操作接种鸡胚尿囊腔，在37℃温箱培养3天→置4℃冰箱4—6小时（使血管收缩）→收集鸡胚尿液→做血凝试验检测尿液有无病毒→如有，还可做血凝抑制试验鉴定病毒，亦可直接检查血清标本中有无病毒血凝抑制抗体。

（1）意义（用途）：（2）结果分析：以能完全抑制血凝的血清最高稀释度作为判断血凝抑制抗体的效价。如晚期血清的血凝抑制抗体为早期的4倍或4倍以上，有诊断价值。

3. 组织培养病毒法（示教）

病毒在正常细胞内增殖后，引起细胞病变。正常细胞：Hep-Ⅱ细胞特点：贴壁，紧密排列，细胞呈多边形。病变细胞：受柯萨奇病毒感染的细胞特点：变圆，坏死，从培养瓶壁上脱落下来。

4. 钩端螺旋体及梅毒螺旋体的形态
5. 真菌

（1）白色念珠菌、新型隐球菌、丝状菌形态。

（2）真菌的培养

条件：22—28℃，湿度60%，沙保培养基菌落的类型：三类

二、学生做实验或看示教

1. 学生自己看示教：病毒包涵体；细胞培养及细胞病变；梅毒螺旋体、钩端螺旋体镀银染色片；真菌大分生孢子、小分生孢子示教。
2. 观察暗视野显微镜下钩端螺旋体的形态并绘图
3. 观察新型隐球菌的形态（墨汁负染色法）并绘图。注意黑色背景下新型隐球菌呈原形发亮体，四周有肥厚的荚膜。
4. 同学观察真菌的菌落，注意鉴别。真菌的小培养：在显微镜下观察真菌的菌丝和孢子并绘图（不同的真菌，其菌丝和孢子不同，可作为鉴别真菌的依据）

(5分钟)